液体型保健食品包括口服液、种方中苯饮料、法测保健酒等品种,定液的含由于含糖类或蛋白质等营养物质,体型在生产和贮藏过程中易氧化变质或受微生物污染而败坏,保健因此,食品通常会添加适量的甲醇防腐剂达到延长保质期的目的。苯甲酸、种方中苯山梨酸、法测对羟基苯甲酸酯类等为常用的定液的含防腐剂,但在实验中发现,体型部分口服液型保健食品中加入了苯甲醇,保健可能作为香料添加,食品也可能为了达到防腐抑菌的甲醇效果。
苯甲醇是种方中苯药用辅料,收载于美国FDA《非活性物质指南》中,是药膏或药液中常用的抑菌剂,一般用量为1~2%。苯甲醇在体内主要由肝脏代谢,易被氧化成苯甲醛和苯甲酸,已有动物毒理实验证明,苯甲酸的口服LD50为1250~1996mg/kg(鼠),苯甲醇的口服LD50为1580mg/kg(鼠),二者具有接近的LD50值,说明苯甲醇具有与苯甲酸类似的毒性。2019年12月1日起施行的《保健食品备案产品可用辅料及其使用规定(2019年版)》中规定,苯甲酸及其钠盐在液体制剂中的最大使用量为1g/kg,未列出苯甲醇及其使用规定。在GB2760-2014《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》中,苯甲醇为允许使用的食品合成香料,是否可用作食品防腐剂未作规定。国外对于食品中苯甲醇、苯甲酸、苯甲酸盐等多类苄基化合物的总使用限值有明确要求,1996年FAO/WHO食品添加剂联合专家委员会(JECFA)规定食品添加剂中苯甲酸(JECFAnumber850)、苯甲酸盐、苯甲醛(JECFAnumber22)、苯甲酸乙酯(JECFAnumber23)、苯甲醇(JECFAnumber25)和苯甲酸苄酯(JECFAnumber24)最高每日允许摄入量(ADI)为0~5mg/kg体重(以苯甲酸当量计),并在2001年第57次JECFA会议中保持了这一结论。
近年来,对于苯甲醇的研究多集中在生产工艺和在药品领域的应用上,针对保健食品中苯甲醇含量测定的报道不多,国家尚未颁布食品中苯甲醇的测定方法,可见,建立保健食品中苯甲醇的含量测定方法,对于加强保健食品中食品添加剂的监控,保障食品安全,具有十分重要的意义。本研究以液体型保健食品为研究对象,建立了气相色谱、高效液相色谱和气相色谱-质谱联用三种苯甲醇的测定方法,并比较了三种方法的优缺点和适用范围,希望能够为建立苯甲醇测定的标准方法、制定合理的限值范围提供参考依据。
精密称取苯甲醇对照品50mg置于50mL量瓶中,加无水乙醇稀释并定容,得对照品储备液。取样品混匀,精密称取1.0g,置于10mL量瓶中,加无水乙醇溶解并超声提取10min,冷却至室温后定容,0.22μm滤膜滤过,得样品溶液。
色谱柱:J&WDB-WAX(60mx0.25mmx0.25μm),升温程序为初始温度150℃,10℃/min升到180℃,保持3min,20℃/min升到230℃,保持5min;载气为氮气,恒流速度1.0mL/min,分流比10:1,检测器温度250℃,进样口温度240℃,进样量1μL。
精密称取苯甲醇对照品25mg置于10mL量瓶中,加50%甲醇溶液稀释并定容,得对照品储备液。取样品混匀,精密称取1.0g置于25mL量瓶中,加适量50%甲醇溶液超声提取10min,冷却至室温后定容,0.22μm滤膜滤过,得样品溶液。
色谱柱:AgilentZORBAXEclipseXDB-C18(4.6x250mm,5μm),流动相为甲醇(A)-20mmo/L乙酸铵溶液(B),梯度洗脱(0~8min,10%A;8.1~20min,30%A;20.1~30min,10%A),流速为1.0mL/min,进样量为10uL,柱温为35℃,检测波长为210nm。
对照品储备液同气相色谱法项下储备液。取样品混匀,精密称取1.0g,置于10mL量瓶中,加无水乙醇溶解并超声提取10min后定容,0.22μm滤膜滤过,精密量取续滤液0.1mL置于10mL量瓶中,加无水乙醇定容,得样品溶液。
色谱条件:色谱柱为J&WDB--624UI(60mx0.25mmx1.4μm),升温程序为初始温度60℃,保持1min,以50℃/min升温至150℃,保持2min,再以10℃/min升温至250℃,保持26min;载气为氦气,初始流量1mL/min,保持20min,以2mL/min升至2mL/min,保持20min,进样口温度250℃,分流比10:1,进样量1μL。
质谱条件:传输线温度260℃,离子源温度280℃,离子化方式EI,电子能量70eV,延迟时间7.3min,检测方式为全扫描(m/z30~300)和SIM选择离子监测模式(定量离子79.0m/z,定性离子107.0m/z和108.0m/z)。
苯甲醇在GC、HPLC、GC-MS三个系统上的色谱图见图1~图3。样品在目标峰位置无杂质干扰。另外,考察了山梨酸、苯甲酸和苯甲醇三种组分的混合溶液在三个系统中的分离效果,结果分离度均大于1.5,满足系统适用性的要求。
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