类成最近的分稳研究表明

1 前言

绿原酸类物质广泛存在于多种植物中，甜叶常见的菊绿来源有金银花、咖啡豆、原酸研究杜仲等。类成最近的分稳研究表明，甜叶菊中绿原酸类成分总含量可达1.7%～7.2%，定性主要的甜叶绿原酸类物质有绿原酸（3-CQA）、新绿原酸（5-CQA）、菊绿隐绿原酸（4-CQA），原酸研究作为新的类成绿原酸类成分来源具有重要开发意义。然而绿原酸与异绿原酸分子中含有的分稳邻二酚羟基结构不稳定，从植物提取过程中，定性受到高温加热、甜叶光照、菊绿pH变化易分解，原酸研究造成提取率下降。

王冬萍等研究表明，异绿原酸A在酸性，低温环境中较为稳定，高温、强碱、活波金属离子及紫外光均可加速其降解。刘兴勇等针对咖啡豆中的绿原酸类物质在烘焙过程中的降解进行研究，结果表明温度和时间的交互作用均对咖啡豆绿原酸类成分含量产生极显著影响。MoonJK等研究同样表明，咖啡豆烘焙的方法导致豆类中的绿原酸浓度降低，因为在烘焙过程中绿咖啡豆中存在的绿原酸类成分有相当大比例被降解成挥发性成分。罗磊等的研究中，金银花的绿原酸含量和L值随干燥温度、装载量和氧体积分数的升高而降低，证实了绿原酸遇热易分解。邱喜龙等考察了绿原酸在水溶液中的稳定性，结果表明绿原酸在酸性、低温条件下较稳定。绿原酸在一定条件下可以转化为新绿原酸等绿原酸类衍生物，主要影响其转化的因素包括：温度、pH、时间等。

本研究以甜叶菊绿原酸为研究对象，考察了光照、温度、提取溶剂、金属离子、氧气对甜叶菊绿原酸稳定性的影响，为绿原酸类成分的提取、加工条件和产品的储存、运输环境选择具有一定的指导意义。

2 材料与方法

2.1 材料与试剂

材料：甜叶菊绿原酸产品，粉末（晨光生物科技集团股份有限公司）；甲醇，分析纯（天津市科密欧化学试剂有限公司）；乙醇，分析纯（天津市科密欧化学试剂有限公司）；盐酸，分析纯（天津市大茂化学试剂厂）；氢氧化钠，分析纯（天津市大茂化学试剂厂）；FeSO₄·7H₂O，分析纯（天津市大茂化学试剂厂）；CuSO₄·5H₂O，分析纯（天津市大茂化学试剂厂）。

2.2 仪器与设备

人工气候箱（上海一恒科学仪器有限公司）；真空包装机（北京吉奥德包装机械有限公司）；电热恒温鼓风干燥箱（天津市华北实验仪器有限公司）；pH计（上海三信仪表厂）；高效液相色谱仪e2695型（沃特世科技（上海）有限公司）；恒温水浴锅（上海森信实验仪器有限公司）；电子分析天平，感量0.00001g（日本岛津公司）。

2.3 色谱条件

试样的前处理：原料需充分粉碎，保证40目筛通过率在95%以上，合并粉碎后样品倒入混样袋中，摇晃10min以上，充分混匀，称取1g（精确至0.0001g）样品至100mL容量瓶中，加入70%甲醇定容，超声2h，冷却至室温后过0.45μm滤膜备用。

色谱条件：色谱柱：PhenomenexKinetex5μmC18100*4.6mm；检测波长：330nm；柱温：25℃；进样量：3μL；流速：1.5mL/min；流动相A：0.1%三氟乙酸；流动相B：乙腈；缓冲液：乙腈∶水∶甲酸=100∶880∶20。

梯度条件见表1。

2.4 实验方法

取甜叶菊绿原酸产品，用80%甲醇配制成20mg/mL的溶液，作为储备液。

2.4.1 光照因素

取甜叶菊绿原酸产品，分为3组，均匀平铺在透明袋中真空包装，将3组样品置于人工气候箱中，温度设定为25℃，光照强度分别设为0lx、3000lx、10000lx，放置20d后取样检测绿原酸产品中各组分含量变化情况。

2.4.2 温度因素

取甜叶菊绿原酸产品于若干培养皿中，45℃、65℃、85℃、105℃下加热，2h、6h、12h取样检测，并取25℃下绿原酸产品作为空白对照。

取储备液于若干磨口锥形瓶中，称重。分别置55℃、65℃、75℃、85℃下水浴回流加热，隔2h、6h、12h取出，待锥形瓶冷却至室温后称重，用80%甲醇溶液补至加热前的重量，混匀后取样检测。

2.4.3 氧气因素

分别精密量取100mL储备液于4个磨口锥形瓶中，称重。在25℃下，1～2号瓶通入氧气，3～4号瓶通入氮气，1、3号瓶在24h称重补重后取样检测，2、4号瓶在48h称重补重后取样检测。

2.4.4 pH因素

取绿原酸产品，用水配制成20mg/mL的溶液，分别精密量取100mL溶液于若干个锥形瓶中，锥形瓶分为两组，一组调节pH至2.0、4.0、6.0、8.0、10.0后称重，取样检测；另一组调节pH至2.0、4.0、6.0、8.0、10.0后称重，25℃放置4h，取样检测。

2.4.5 金属离子因素

取甜叶菊绿原酸产品，用80%甲醇配制成16.67mg/mL的溶液，取样作为空白对照。精密量取100mL溶液于若干个锥形瓶中，锥形瓶分为两组，一组加入30.3mL、60.6mL、121.2mL的1mmol/LCuSO4溶液；另一组加入30.3mL、60.6mL、121.2mL的1mmol/LFeSO4溶液。两组溶液分别于0、4h取样检测。

3 结果与讨论

下文中试验数据均为单一测量值。

3.1 光照因素

甜叶菊绿原酸产品在0lx光照强度下总酸含量为24.67%，5-CQA含量为14.59%，含量无损失；3000lx光照下总酸含量减少1.3%，5-CQA含量减少0.31%；10000lx光照强度下总酸含量减少2.9%，5-CQA含量减少1.1%。数据表明光照强度越高，绿原酸类成分含量减少的幅度越大。

相关链接：绿原酸，氢氧化钠，盐酸，乙腈

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